Cómo se usa
- Fija el volumen de una reacción terminada y cuántas vas a preparar.
- Decide el exceso. Un porcentaje crece con el lote; sumar reacciones enteras va mejor cuando son pocas.
- Anota qué lleva una reacción. Puedes poner el volumen directamente, o la concentración de la solución madre y la final y dejar que salga el volumen.
- Deja el agua como el componente que completa el resto. Será el volumen de reacción menos todo lo demás.
- Lee la columna del total: eso es lo que se pipetea en el tubo.
Cómo se calcula y qué vigilar
Cada componente pasa de una reacción al lote entero, y uno de ellos absorbe la diferencia.
Un volumen a partir de la solución madre y la concentración final
Es lo único que sigue siendo correcto si cambia el volumen de reacción, y por eso conviene entrarlo así.
- µL por reacción = conc. final ÷ conc. madre × volumen de reacción
El lote
El exceso se aplica una sola vez, al número de reacciones, así que la proporción entre componentes se mantiene.
- reacciones preparadas = reacciones × (1 + exceso ÷ 100)
- µL totales = µL por reacción × reacciones preparadas
El componente que completa el resto
- agua = volumen de reacción − todo lo demás
Conviene saber
- El exceso hace falta porque siempre queda algo en la punta y en el tubo. El 10 % es un punto de partida habitual; con muy pocas reacciones resulta más claro sumar una o dos reacciones enteras.
- Si hay concentración madre y final, mandan sobre el volumen escrito a mano. No se oculta nada: el volumen que sale es el que muestra la tabla.
- Aquí el molde es un componente más. En una placa se añade pocillo a pocillo, y esa es la diferencia entre esta herramienta y el diseñador de placas de PCR.
- Esta herramienta y el diseñador de placas de PCR comparten una sola implementación de la receta, así que no pueden dar números distintos.
Preguntas frecuentes
El suficiente para cubrir lo que deja la pipeta, que depende de cuántos traspasos hace falta y no de una regla. La mayoría de los protocolos empieza en el 10 %. Con unas pocas reacciones, sumar una o dos reacciones enteras es más fácil de razonar que un porcentaje.
Porque es el único componente cuyo volumen no se decide. Es el volumen de reacción menos todo lo demás, así que cambia en cuanto cambia cualquier otro.
Sí. Da la concentración de la solución madre y la final en las mismas unidades y el volumen sale del volumen de reacción. Es la entrada que conviene hacer, porque sigue siendo correcta si más adelante cambias el volumen de reacción.
Solo en cómo llega el número de reacciones. Aquel cuenta los pocillos que has repartido; este recibe el número. El cálculo de debajo es el mismo código, así que para la misma mezcla dan la misma respuesta.
Entonces no queda sitio para el agua y no se puede preparar tal como está escrito. O el volumen de reacción es pequeño, o el volumen de algún componente es demasiado grande.
Se usan a menudo juntas
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Diseñador de placas de PCR y master mix
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