Cómo se usa
- Elige el antibiótico. Se rellenan sus concentraciones estándar de solución madre y de trabajo, junto con el disolvente en el que se disuelve.
- Si tu solución madre es distinta de la estándar, edita la concentración: al hacerlo, el nombre pasa a «Introducir el mío».
- Introduce los volúmenes de medio. Varios a la vez, separados por comas o saltos de línea, dan una fila de respuestas cada uno.
- Añade al medio el volumen indicado de solución madre y mezcla. Para las placas, espera a que el agar se haya enfriado hasta unos 60°C.
Fórmula y notas prácticas
La dilución en sí es C₁V₁ = C₂V₂, una sola línea. Lo que hace de esto una página propia son las dos cosas que la rodean: las concentraciones de cada antibiótico que todo el mundo busca cada vez, y hacer de una vez varios frascos de medio.
La aritmética
Fijar las unidades en mg/mL y μg/mL hace desaparecer la conversión, porque 1 mg/mL es lo mismo que 1 μg/μL.
- Volumen a añadir (μL)
- trabajo (μg/mL) × medio (mL) ÷ solución madre (mg/mL)
- Dilución en veces
- solución madre (mg/mL) × 1000 ÷ trabajo (μg/mL)
Notas prácticas
- Estos valores estándar son para seleccionar E. coli. La cepa, el número de copias del plásmido y el medio los desplazan todos, así que sigue tu propio protocolo cuando lo tengas.
- La ampicilina se degrada rápido, en las placas y en la solución madre. En su lugar se usa a menudo la carbenicilina: es más estable y da menos colonias satélite, aunque cuesta más.
- El cloranfenicol se disuelve en etanol y la cumermicina en DMSO; los demás van en agua. Una solución madre en disolvente puede afectar al cultivo si entra demasiada, que es otro motivo para mantener las soluciones madre concentradas a unos 1000× y añadir muy poco.
- Esta calculadora hace aritmética con concentraciones y volúmenes. Qué antibiótico y cuánto es una cuestión de diseño experimental, y los valores estándar de aquí son un punto de partida.
Preguntas frecuentes
Porque así 1 mL entra en 1 L de medio. El volumen añadido es lo bastante pequeño como para no cambiar el medio, y la aritmética se vuelve mental: el medio en mL dividido entre 1000. Los nueve valores estándar de esta lista salen exactamente a 1000×.
La fórmula es la misma. Cambian dos cosas: esta lleva las concentraciones estándar de solución madre y de trabajo y el disolvente de cada antibiótico, así que no hay nada que buscar, y acepta varios volúmenes de medio a la vez.
Esteriliza por filtración, reparte en alícuotas y guarda a −20°C. Sin ciclos repetidos de congelación y descongelación aguantan al menos de 3 a 6 meses. No esterilices por calor: autoclavar degrada los antibióticos.
Cuando el agar autoclavado se haya enfriado hasta unos 60°C. A esa temperatura el agar sigue líquido y la mayoría de los antibióticos no se descomponen. Si no puedes sujetar el frasco con guantes puestos, déjalo enfriar más.
Ese volumen es difícil de pipetear con exactitud. Diluye diez veces la solución madre y añade diez veces más, o prepara un lote de medio más grande y repártelo. La calculadora marca esas filas pero sigue enseñando el número.