Cómo se usa
- Introduce las células contadas en cada cuadrado grande. Sepáralas con comas, espacios o saltos de línea, o pégalas directamente desde una hoja de cálculo.
- Introduce el factor de dilución. Por defecto es 1. Pon 2 si mezclaste 1:1 con azul de tripano.
- Las células/mL aparecen en grande, con el recuento medio y el número de cuadrados contados al lado.
- Añade el recuento de células muertas y se calcula la viabilidad. (opcional)
- Añade el volumen total de la suspensión y se calcula el número total de células. (opcional)
- Añade el número de células que necesitas y obtendrás el volumen que hay que tomar. (opcional)
💡 Los exponentes se pueden escribir con e; por ejemplo, 1.5×10⁻⁵ se escribe 1.5e-5.
Fórmula del recuento celular y notas prácticas
Un hemocitómetro es una cámara muy pequeña de volumen conocido con precisión. Cuenta las células que hay dentro y ya sabes la concentración.
Un cuadrado grande de un hemocitómetro estándar mide 1 mm por 1 mm, y el cubreobjetos queda 0.1 mm por encima.
- Volumen sobre un cuadrado
- 1 mm × 1 mm × 0.1 mm = 0.1 mm³ = 0.1 μL = 10⁻⁴ mL
Así que las células contadas en un cuadrado grande son las células que hay en 10⁻⁴ mL, y convertir eso en una concentración por mL significa multiplicar por 10⁴.
- Concentración
- células/mL = recuento medio por cuadrado grande × factor de dilución × 10⁴
El 10⁴ sale de las dimensiones de la cámara. No es una constante arbitraria.
Todo lo demás se deduce a partir de ahí.
- Células totales
- células totales = células/mL × volumen(mL)
- Viabilidad
- viabilidad(%) = vivas ÷ (vivas + muertas) × 100
- Volumen que hay que tomar
- volumen = células necesarias ÷ células/mL
Notas prácticas
- El factor de dilución es 1 por defecto. Si mezclaste 1:1 con azul de tripano tienes que cambiarlo a 2. Si lo dejas, el recuento sale a la mitad del valor real. Un recuento celular equivocado no parece equivocado, así que este error suele salir a la luz mucho más tarde.
- Lo habitual es contar entre 20 y 250 células por cuadrado. Con muy pocas manda el azar; con demasiadas se solapan y se escapan. Fuera de ese rango, diluye o concentra la muestra y vuelve a contar.
- Decide una regla para las células que caen sobre las líneas y mantenla. La habitual es contar las células que tocan la línea de arriba y la de la izquierda y no las de abajo ni las de la derecha. Los resultados se separan cuando cada persona usa una regla distinta.
- Mezcla bien antes de cargar. Las células sedimentan. Pipetea con suavidad unas cuantas veces y carga al momento.
- El azul de tripano también tiñe las células vivas si se le da tiempo. Cuenta dentro de los tres a cinco minutos siguientes a la mezcla. Si lo dejas más, la viabilidad sale más baja de lo que es.
- Los grumos de células dificultan el recuento. Dispersa hasta tener células sueltas antes de contar, y decide de antemano si un grumo cuenta como uno o como las células que lo forman.
- El motivo de contar varios cuadrados es promediarlos. Lo habitual son los cuatro cuadrados grandes de las esquinas. Una dispersión grande entre cuadrados significa que la muestra no se mezcló o no se dispersó bien.
Preguntas frecuentes
Se usan a menudo juntas
Siembra celular y razón de subcultivo
Suspensión y medio para cada recipiente, a partir de tu densidad y viabilidad actuales: varios tipos de recipiente en un mismo plan, con los pocillos periféricos y la preparación en volumen ya contemplados.
Analizador de curvas de crecimiento
Obtiene la tasa de crecimiento y el tiempo de duplicación a partir de una serie temporal.
CV (coeficiente de variación)
Pega tus medidas y obtén la media, la desviación estándar y el CV (%).