Cómo se usa
- Pega las columnas de sustrato y de velocidad *inicial*. La velocidad inicial es la pendiente del primer tramo recto de una curva de progreso.
- Reparte las concentraciones de sustrato a ambos lados de Km, desde unos 0.2 × Km hasta pasar de 5 × Km cuando el experimento lo permita.
- Comprueba en el resultado a cuántas Km llegó el sustrato más alto. Por debajo de 5 × Km aparece un aviso, y esa Vmax no debe usarse tal cual.
- Mira si los puntos se aplanan en el borde derecho de la gráfica. Si siguen subiendo, hay que llegar a sustratos más altos.
💡 Sirve cualquier unidad: Km sale en tus unidades de concentración y Vmax en tus unidades de velocidad.
Fórmula y precauciones
La velocidad sube con el sustrato hasta que la enzima se satura y deja de subir. Escribir esa forma con dos números es la ecuación de Michaelis–Menten.
Los dos parámetros
Vmax es la velocidad con sustrato infinito; Km es la concentración de sustrato a la que la velocidad es la mitad.
- Velocidad
- v = Vmax · [S] / (Km + [S])
- Km, por definición
- v(Km) = Vmax / 2
Vmax / Km
La pendiente de la curva con sustrato muy diluido. Es el mejor número único para comparar enzimas o sustratos, porque resume un cambio en cualquiera de los dos parámetros donde Km o Vmax por separado contarían media historia.
Por qué Km siempre es positiva
Los puntos ruidosos a sustrato bajo pueden hacer que una Km negativa salga aritméticamente más barata. Pero una Km negativa no es una constante de velocidad: es la búsqueda saliéndose del modelo, así que ambos parámetros se mantienen positivos.
Precauciones
- ⛔ Si no son velocidades *iniciales*, la ecuación no se aplica. Las lecturas de punto final, o las tomadas cuando la reacción ya se ha frenado, siguen produciendo una curva y una Km y ninguna significa nada. Ningún cálculo puede detectarlo.
- Sin sustrato bastante por encima de Km, la Vmax la fija el modelo y no los datos. Por eso el sustrato más alto se informa siempre en múltiplos de Km.
- Km no es una propiedad fija de una enzima: es el valor en esas condiciones. El pH, la temperatura, la fuerza iónica y el amortiguador la mueven. Compara las condiciones antes que los números.
- Una R² alta no significa que el modelo sea correcto. Importa más si los puntos se dispersan de forma pareja a lo largo de la curva.
- Los errores estándar dicen con cuánta estrechez tus puntos fijan Km y Vmax. La reproducibilidad del ensayo es otra pregunta que solo responden las réplicas.
Preguntas frecuentes
Se usan a menudo juntas
Calculadora de IC50 y EC50
Ajusta una sigmoide a datos de dosis–respuesta y devuelve la concentración semimáxima y la pendiente de Hill.
Molaridad
Calcula la masa, el peso molecular, el volumen o la molaridad a partir de los otros tres.
Selector de prueba estadística
Elige la prueba estadística que encaja con tus datos y la ejecuta.