사용 방법
- 초기 농도와 희석 배수, 단계 수를 입력합니다. 예를 들어 10배씩 5단계라면 배수 10, 단계 5입니다.
- 튜브당 총 부피는 선택 입력입니다. 비워 두면 단계별 농도만 산출되고, 입력하면 각 단계에서 옮길 양과 채울 희석액 양까지 함께 계산됩니다.
- 표의 「희석 배수」 칸을 수정하면 단계마다 다른 배수를 적용할 수 있습니다. 하나라도 다르게 입력하면 위쪽 배수 입력란이 「사용자 설정」으로 변경됩니다.
- 되돌리려면 [배수 모두 같게]를 누르세요. 배수 칸을 비우면 위쪽 공통 배수를 따릅니다.
- 입력하는 즉시 계산됩니다. 별도의 계산 버튼은 없습니다.
공식 설명 및 주의사항
연속 희석은 동일한 희석을 여러 번 반복해 넓은 농도 범위를 만드는 방법입니다. 한 번에 10,000배를 희석하려면 매우 작은 부피를 옮겨야 해 오차가 커지지만, 10배씩 4회로 나누면 매번 다루기 쉬운 부피로 동일한 결과에 도달합니다.
각 단계의 농도는 앞 단계 농도를 배수로 나눈 값입니다.
- n단계 농도
- Cₙ = C₀ ÷ (배수)ⁿ
단계마다 배수가 다르면 그때까지의 배수를 모두 곱한 값으로 나눕니다.
- 배수가 다를 때
- Cₙ = C₀ ÷ (f₁ × f₂ × … × fₙ)
튜브당 총 부피 V를 정하면, 각 단계에서 옮길 양과 채울 양은 다음과 같이 산출됩니다.
- 옮길 양
- V ÷ 배수
- 채울 희석액
- V − (V ÷ 배수)
10배 희석에 총 부피 1 mL이면 앞 튜브에서 100 μL를 옮기고 희석액 900 μL를 채웁니다.
실무 주의사항
- 각 단계마다 충분히 혼합해야 합니다. 혼합하지 않고 다음 단계로 옮기면 그 오차가 이후 모든 단계에 누적됩니다. 연속 희석의 오차는 곱으로 누적되므로 초반 실수일수록 영향이 큽니다.
- 단계마다 팁을 교체하세요. 앞 단계의 고농도 용액이 팁 외벽에 묻어 이월되면 이후 농도가 계산값보다 높아집니다.
- 이송량이 매우 작아지면(대략 1 μL 미만) 배수를 낮추고 단계를 늘리는 편이 정확합니다. 10배 5단계보다 5배 7단계가 다루기 쉬운 경우가 많습니다.
- 표에 산출되는 부피는 각 튜브를 해당 총 부피로 맞추는 기준입니다. 마지막 튜브에서 실제 사용량이 더 필요하면 총 부피를 여유 있게 설정하세요. 앞 튜브에서 다음 단계로 옮기면 그만큼 감소합니다.
- 흡착성이 강한 물질(일부 단백질, 올리고 등)은 저농도 구간에서 계산값보다 낮게 측정될 수 있습니다. 저흡착 튜브나 담체 첨가를 고려하세요.
자주 묻는 질문
단계별 농도만 계산합니다. 농도만 확인하고 실제 조제는 나중에 할 때 유용합니다. 총 부피를 입력하면 각 단계에서 옮길 양과 채울 양이 열로 추가됩니다.
표의 「희석 배수」 칸을 직접 수정하면 됩니다. 하나라도 다르게 입력하면 위쪽 공통 배수 입력란이 「사용자 설정」으로 변경되며, [배수 모두 같게] 버튼으로 언제든 되돌릴 수 있습니다. 배수 칸을 비우면 그 단계는 위쪽 공통 배수를 따릅니다.
최종 부피입니다. 1 mL로 설정하면 각 튜브가 1 mL가 되도록 옮길 양과 희석액 양을 배분해 계산합니다.
앞 튜브에서 다음 단계로 옮기면 그만큼 감소하기 때문입니다. 실제 사용량을 감안해 총 부피를 여유 있게 설정하세요. 예를 들어 각 농도로 200 μL씩 사용할 계획이면 총 부피를 500 μL 이상으로 설정하는 편이 안전합니다.
동일한 최종 농도라면 단계를 나눌수록 1회 이송 부피가 커져 정확합니다. 다만 단계가 많으면 조작 횟수와 누적 오차 가능성도 함께 증가합니다. 이송량이 10 μL 이상 확보되는 선에서 단계를 가장 적게 두는 조합이 실무적으로 무난합니다.
값이 일정 크기보다 작아지면 지수 표기(예: 1e-5)로 전환됩니다. 자릿수가 많아 가독성이 떨어지는 것을 방지하기 위해서입니다.