qPCR 증폭 효율 계산기

기울기를 직접 넣거나, 농도와 Ct 를 넣어 표준곡선에서 구할 수 있습니다.

계산 모드

이미 구해 둔 표준곡선 기울기를 넣습니다.

표준곡선 기울기 (slope)

기울기는 표준곡선 회귀 계산기에서 구할 수 있습니다. 거기서 나온 기울기를 그대로 넣으세요.

사용 방법

입력 방식을 고릅니다. 두 가지가 있습니다 — 기울기 직접 입력은 표준곡선의 기울기를 이미 알고 있을 때, 표준곡선에서 구하기는 농도와 Ct 값만 있을 때입니다. 표준곡선에서 구하기는 회귀와 그래프까지 함께 계산됩니다.
기울기 직접 입력은 값 하나만 넣으면 됩니다. 기울기는 음수입니다.
표준곡선에서 구하기는 표에 농도와 Ct 쌍을 입력합니다. 엑셀에서 두 열을 복사해 붙여넣어도 됩니다. 행은 추가·삭제할 수 있습니다. 농도는 원래 값 그대로 넣으세요 — 로그는 내부에서 취합니다.
결과에 효율(%)이 크게 표시되고, 그 아래에 사이클당 증폭 배수가 나옵니다. 표준곡선 모드에서는 기울기·절편·R²·점 개수와 그래프가 함께 표시됩니다.
희석배수는 선택 입력입니다. 계산에는 들어가지 않고, 단계별 Ct 간격이 얼마여야 하는지 알려주는 안내에만 쓰입니다.

지수는 e를 사용해 입력할 수 있습니다. 예를 들어 1.5×10⁻⁵ 은 1.5e-5 로 입력하면 계산됩니다.

qPCR에서 표준곡선은 알고 있는 농도의 시료를 단계별로 희석해 각각의 Ct를 측정하고, log₁₀(농도)와 Ct 사이의 직선을 구한 것입니다.

농도가 높을수록 Ct가 낮으므로 기울기는 음수입니다.

한 사이클마다 산물이 일정 배수 F로 늘어난다고 하면, 형광이 임계치에 닿는 시점에서 다음이 성립합니다.

양변에 로그를 취해 정리하면 기울기와 F의 관계가 나옵니다.

F가 사이클당 증폭 배수입니다. 완전히 두 배가 되면 F = 2이고, 이때 기울기는 −1 ÷ log₁₀2 = −3.3219입니다.

효율은 한 사이클에 늘어난 비율이므로 F에서 1을 뺀 값입니다.

F = 2 이면 효율 100%입니다. 이론상 최대가 200%가 아니라 100%인 이유가 여기 있습니다 — DNA는 두 가닥이라 한 사이클에 최대 두 배까지만 늘어납니다.

절편은 log₁₀(농도)가 0일 때, 즉 농도가 1일 때의 Ct입니다. 절대 정량에서는 이 값을 읽습니다. 그래서 이 계산기는 절편을 0으로 강제하는 기능을 제공하지 않습니다. 표준곡선 계산기와 다른 점입니다.

이상적인 기울기 −3.3219는 희석배수와 무관합니다. 기울기는 ‘농도가 10배 바뀔 때 Ct가 몇 사이클 움직이는가’이므로 어떤 배수로 희석했든 같습니다.

희석배수가 바꾸는 것은 단계 사이의 Ct 간격입니다.

10배 희석이면 3.32 사이클, 2배 희석이면 1.00 사이클입니다. 이 값은 데이터가 제대로 나왔는지 눈으로 확인할 때 씁니다.

기울기가 양수로 나오면 축이 뒤바뀐 것입니다. Ct를 y축, log(농도)를 x축에 두어야 합니다. 이 계산기는 양수 기울기를 받으면 계산을 거부하고, 부호를 뒤집은 값만 참고로 보여줍니다. 답을 주지 않는 이유는 축이 바뀌었다는 것이 확실한 해석이 아니기 때문입니다.
90~110%는 흔히 쓰는 참고 범위이지 합격 기준이 아닙니다. 이 계산기는 값을 계산할 뿐 판정하지 않습니다. 허용 범위는 검사 항목과 실험실 절차서가 정합니다.
효율이 100%를 넘는 것은 대개 저해 물질 때문입니다. 진짜로 두 배 이상 늘어난 것이 아니라, 농도가 진한 시료에서 저해가 걸려 Ct가 예상보다 늦게 나오면서 기울기가 완만해진 결과입니다. 가장 진한 표준을 빼고 다시 계산해 보세요.
표준곡선 범위를 벗어난 점은 넣지 마세요. 너무 진하면 저해가, 너무 묽으면 확률적 변동이 커집니다.
R²가 높아도 효율이 맞다는 뜻은 아닙니다. R²는 점들이 직선을 얼마나 잘 따르는지만 말합니다. 저해가 모든 점에 고르게 걸리면 직선은 예쁘게 나오면서 기울기만 틀어집니다.
농도가 0 이하인 행은 계산에서 빠집니다. 로그를 취할 수 없기 때문이며, 몇 개가 빠졌는지 화면에 표시됩니다.