사용 방법
- A260 흡광도를 입력합니다.
- 핵산 종류를 선택합니다. 종류마다 환산계수가 다릅니다(dsDNA 50, ssDNA 33, RNA 40, ssOligo 33).
- 분광광도계에서 시료를 희석해 측정했다면 희석배수를 입력합니다. 희석하지 않았으면 1입니다.
- 시료 부피를 입력하면 총량(μg)까지 계산됩니다. (선택)
- A280, A230을 입력하면 순도 지표 A260/A280, A260/A230이 함께 표시됩니다. (선택)
💡 지수는 e를 사용해 입력할 수 있습니다. 예를 들어 1.5×10⁻⁵ 은 1.5e-5 로 입력하면 계산됩니다.
공식 설명 및 주의사항
핵산은 260 nm 부근에서 빛을 가장 강하게 흡수합니다. 염기의 고리 구조가 그 파장을 흡수하기 때문입니다. 흡광도가 농도에 비례하므로, 알려진 환산계수를 곱하면 농도가 산출됩니다.
- 농도
- 농도(μg/mL) = A260 × 환산계수 × 희석배수
- 총량
- 총량(μg) = 농도(μg/mL) × 부피(mL)
환산계수는 A260 = 1일 때의 농도를 뜻합니다.
| 핵산 종류 | 환산계수 (μg/mL) |
|---|---|
| dsDNA (이중가닥 DNA) | 50 |
| ssDNA (단일가닥 DNA) | 33 |
| RNA | 40 |
| ssOligo (단일가닥 올리고) | 33 |
종류마다 값이 다른 이유는 염기의 적층 구조에 따라 흡광이 달라지기 때문입니다. 이중가닥은 염기가 서로 겹쳐 적층되어 있어 동일한 양이라도 흡광이 낮게 측정됩니다.
μg/mL과 ng/μL은 수치가 동일합니다. 1 μg/mL = 1 ng/μL이므로 두 단위로 표시해도 숫자는 변하지 않습니다. 화면에 둘 다 표시하는 것은 어느 단위로 기록하든 그대로 옮겨 적을 수 있도록 하기 위해서입니다.
순도 지표
| 비율 | 참고 범위 | 낮을 때 의심해 볼 것 |
|---|---|---|
| A260/A280 | DNA 약 1.8, RNA 약 2.0 | 단백질, 페놀 잔류 |
| A260/A230 | 약 2.0 ~ 2.2 | 염류(구아니딘, 아세트산염), 유기용매 잔류 |
이 값들은 참고 지표이며 합격·불합격 판정 기준이 아닙니다. 후속 실험의 성공 여부는 시료와 용도에 따라 다릅니다. 범위를 벗어났다고 반드시 사용할 수 없는 것도, 범위 안이라고 반드시 순수한 것도 아닙니다.
실무 주의사항
- A260이 0.1 ~ 1.0 범위를 벗어나면 값의 신뢰도가 떨어집니다. 분광광도계의 선형 범위를 벗어나기 때문입니다. 너무 높으면 희석해 재측정하고, 너무 낮으면 농축하거나 더 정밀한 방법을 고려하세요.
- 블랭크는 시료를 용해한 것과 동일한 용액으로 설정합니다. 물에 용해했으면 물로, TE 버퍼에 용해했으면 동일한 TE로 설정합니다. 다르면 A230이 특히 크게 어긋납니다.
- 흡광법은 순수한 핵산만 측정하지 않습니다. 유리 뉴클레오타이드, 단일가닥 단편, 잔존 프라이머도 260 nm를 흡수합니다. 정확한 정량이 필요하면 형광 염료 기반 방법이 적합합니다.
- RNA에 DNA가 혼입되어 있어도 흡광법은 이를 구별하지 못합니다. 종류 선택은 계산에 사용할 계수를 고르는 것일 뿐, 시료가 실제로 그 종류임을 확인하는 절차가 아닙니다.
- 시료가 혼탁하면 산란으로 인해 흡광도가 높게 측정됩니다. A320이 0에 근접하는지 확인하는 것이 관행입니다.
자주 묻는 질문
두 단위의 크기가 동일하기 때문입니다. 1 μg/mL = 1 ng/μL입니다. 계산 오류가 아니라 단위 정의상 같은 값이며, 어느 쪽으로 기록하든 그대로 사용하실 수 있도록 두 표기를 함께 표시합니다.
동일한 질량이라도 구조에 따라 260 nm 흡광이 다르기 때문입니다. 이중가닥 DNA는 염기가 겹쳐 적층되어 있어 흡광이 낮게 측정되고(계수 50), 단일가닥은 염기가 노출되어 있어 흡광이 크게 측정됩니다(계수 33).
단정할 수 없습니다. 1.8보다 낮으면 단백질이나 페놀 잔류를 의심할 수 있다는 뜻이지, 후속 실험이 불가능하다는 뜻은 아닙니다. 용도에 따라 허용 범위가 다르므로 검사실이나 실험 프로토콜의 기준을 따르세요.
분광광도계의 선형 범위를 벗어났을 가능성이 큽니다. 시료를 희석해 A260이 0.1 ~ 1.0 범위에 들어오도록 한 뒤 재측정하고, 희석배수 칸에 해당 배수를 입력하세요.
측정 시 시료를 몇 배로 희석했는지를 입력합니다. 원액 10 μL에 물 90 μL를 더해 측정했다면 10배이므로 10을 입력합니다. 희석하지 않았으면 1입니다.
정제 과정에서 잔류한 염류나 유기용매를 확인하기 위해서입니다. 구아니딘, 아세트산염, 페놀 같은 물질이 230 nm 부근을 흡수하므로, A260/A230이 낮으면 잔류를 의심할 수 있습니다.
흡광법은 260 nm를 흡수하는 물질을 모두 함께 측정합니다. 유리 뉴클레오타이드나 잔존 프라이머도 포함되므로 실제 온전한 핵산보다 높게 측정될 수 있습니다. 형광 염료 기반 방법은 특정 형태의 핵산에만 결합해 선택성이 높습니다. 정밀한 정량이 필요하면 그쪽을 사용하세요.
참고문헌
환산계수의 출처입니다. 농도 = A260 × 계수 × 희석배수 자체는 비어–람베르트 법칙의 정리라 인용하지 않습니다.
- Thermo Scientific NanoDrop Spectrophotometers. Nucleic Acid — Technical Guide (T104, Rev. 11/2010). Thermo Fisher Scientific.https://documents.thermofisher.com/TFS-Assets/CAD/Warranties/Thermo-Scientific-NanoDrop-Products-Nucleic-Acid-Technical-Guide-EN.pdfdsDNA 50 · ssDNA 33 · RNA 40 µg/mL per A260 — 10쪽 「Constant Used to Calculate Concentration」 표
- New England Biolabs. Nucleic Acid Data (usage guidelines). Read 2026-08-21.https://www.neb.com/en/tools-and-resources/usage-guidelines/nucleic-acid-data같은 세 값을 독립적으로 적은 두 번째 자료 — 「1.0 A260 unit ds DNA = 50 µg/ml · ss DNA = 33 · ss RNA = 40」
ssOligo의 33은 위 두 문서에 없습니다. NanoDrop은 올리고에 서열별 계산값을 사용합니다. 이 도구의 33은 단일가닥 DNA 값을 그대로 적용한 관례이며 1차 출처를 확인하지 못했습니다.