사용 방법
- 각 대구획에서 센 세포 수를 입력합니다. 여러 개를 쉼표·공백·줄바꿈으로 구분해 넣거나, 엑셀에서 복사해 붙여넣어도 됩니다.
- 희석배수를 입력합니다. 기본값은 1입니다. 트리판블루와 1:1로 섞었다면 2를 넣으세요.
- cells/mL이 크게 표시되고, 평균 세포 수와 계수한 구획 수가 함께 나옵니다.
- 사멸 세포 수를 넣으면 생존율이 계산됩니다. (선택)
- 현탁액 총 부피를 넣으면 총 세포 수가 계산됩니다. (선택)
- 필요한 세포 수를 넣으면 얼마를 덜어내야 하는지 부피가 나옵니다. (선택)
지수는 e를 사용해 입력할 수 있습니다. 예를 들어 1.5×10⁻⁵ 은 1.5e-5 로 입력하면 계산됩니다.
공식 설명 및 주의사항
혈구계산판은 부피를 정확히 아는 아주 작은 방입니다. 그 방 안의 세포를 세면 농도를 알 수 있습니다.
표준 혈구계산판의 대구획 하나는 가로 1 mm, 세로 1 mm이고 커버글라스까지의 깊이가 0.1 mm입니다.
- 대구획 부피
- 1 mm × 1 mm × 0.1 mm = 0.1 mm³ = 0.1 μL = 10⁻⁴ mL
즉 대구획 하나에서 센 세포 수는 10⁻⁴ mL 안의 세포 수이므로, mL당 농도로 바꾸려면 10⁴을 곱합니다.
- 농도
- cells/mL = 대구획 평균 세포 수 × 희석배수 × 10⁴
10⁴이라는 숫자는 계산판의 규격에서 나온 것이지 임의의 상수가 아닙니다.
나머지 값은 여기서 이어집니다.
- 총 세포 수
- 총 세포 수 = cells/mL × 총 부피(mL)
- 생존율
- 생존율(%) = 생존 세포 ÷ (생존 + 사멸) × 100
- 필요 부피
- 필요 부피 = 필요한 세포 수 ÷ cells/mL
실무 주의사항
- 희석배수 기본값은 1입니다. 트리판블루와 1:1로 섞었다면 반드시 2로 바꾸세요. 넣지 않으면 실제의 절반으로 계산됩니다. 세포 수는 틀려도 틀려 보이지 않기 때문에 이 실수는 나중에야 드러납니다.
- 구획당 20~250개 범위에서 세는 것이 관례입니다. 너무 적으면 우연에 좌우되고, 너무 많으면 겹쳐서 놓칩니다. 범위를 벗어나면 시료를 희석하거나 농축해 다시 세세요.
- 경계선 규칙을 정해두고 일관되게 지키세요. 흔히 위쪽과 왼쪽 선에 걸친 세포는 세고, 아래쪽과 오른쪽은 세지 않습니다. 규칙이 사람마다 다르면 결과가 달라집니다.
- 넣기 전에 충분히 섞으세요. 세포는 가라앉습니다. 피펫으로 부드럽게 몇 번 섞은 뒤 즉시 넣습니다.
- 트리판블루는 시간이 지나면 살아 있는 세포도 물들입니다. 섞은 뒤 3~5분 안에 세는 것이 좋습니다. 오래 두면 생존율이 실제보다 낮게 나옵니다.
- 덩어리진 세포는 계수를 어렵게 합니다. 세기 전에 단일 세포로 잘 분산시키세요. 덩어리를 하나로 셀지 개수를 셀지도 미리 정해두어야 합니다.
- 여러 구획을 세는 이유는 평균을 내기 위해서입니다. 보통 네 모서리 대구획을 셉니다. 구획 간 편차가 크면 섞임이 부족하거나 분산이 안 된 것입니다.