Lab-Tacular

PCR 조건 설계기

중합효소와 앰플리콘 길이로 사이클링 조건표를 만듭니다.효소와 앰플리콘 길이를 입력하세요.

제조사 프로토콜을 그대로 인용한 값입니다. 표 아래에 원문 링크가 있습니다.

프라이머 바깥쪽까지 포함한 산물 전체 길이입니다.

사용 방법

  1. 사용하는 중합효소를 선택합니다. ⚠️ 효소마다 「온도가 다릅니다」. 같은 Taq 계열이라도 신장 온도가 68 °C 인 것과 65 °C 인 것이 있습니다.
  2. 앰플리콘 전체 길이를 bp 단위로 입력합니다. 신장 시간만 이 길이로 계산되고, 나머지 행은 프로토콜 값 그대로입니다.
  3. 표를 그대로 서멀사이클러에 입력합니다. 파란 행 3개가 반복되는 구간이고, 옆의 「× 숫자」가 사이클 수입니다.
  4. 어닐링 온도는 「범위」로만 표시됩니다. 그 칸의 「Tm 계산기」 링크로 이동해 프라이머로 직접 계산하십시오.

💡 표 아래 링크는 그 값을 인용한 제조사 프로토콜 원문입니다. 조건이 맞지 않으면 원문부터 확인하십시오.

공식과 주의사항

이 도구가 「계산」하는 것은 신장 시간 하나뿐입니다. 나머지 행은 제조사가 인쇄한 값을 그대로 인용한 것입니다.

신장 시간

효소마다 정해진 초/kb 에 앰플리콘 길이를 곱합니다. 서멀사이클러가 정수 초 단위로 입력받으므로 올림합니다.

신장 시간
t = (초/kb) × (앰플리콘 bp ÷ 1000)

⚠️ 표를 효소마다 따로 둔 이유

여기 실린 효소 5종의 신장 온도가 「3가지」로 나뉩니다. 72 °C · 68 °C · 65 °C 입니다. 변성 온도도 94 · 95 · 98 °C 로 나뉩니다. 「대체로 이렇다」는 한 문장을 쓰면 5종 중 3종에서 틀립니다. 그래서 일반화하지 않고 프로토콜을 그대로 싣습니다.

⛔ 어닐링 온도를 하나로 정해 주지 않는 이유

여기 실린 프로토콜 5종이 모두 제조사 Tm 계산기를 사용하라고 「본문에」 명시하고 있습니다. 어닐링 온도는 프라이머 서열·염 농도·완충액에 따라 달라져 효소만으로는 결정할 수 없습니다. 그래서 프로토콜에 인쇄된 범위를 그대로 표시하고, 그 칸에서 Tm 계산기로 이동하도록 해 두었습니다.

주의사항

  • 여기 실린 것은 「루틴 PCR」 조건입니다. GC 함량이 높거나, 이차구조가 심하거나, 주형이 매우 적거나, 앰플리콘이 매우 길면 프로토콜 본문이 추가 최적화를 안내합니다. 링크에서 확인하십시오.
  • 앰플리콘 길이는 프라이머 「바깥쪽 끝까지」 측정하십시오. 프라이머 사이 거리만 측정하면 신장 시간이 짧게 계산됩니다.
  • 표에 없는 효소는 수록하지 않았습니다. 프로토콜을 직접 확인하지 않은 값을 여기 적으면 화면에서는 출처 있는 값과 구별되지 않기 때문입니다.
  • 핫스타트 효소는 초기 변성 조건이 다를 수 있습니다. 사용하시는 제품의 프로토콜을 확인하십시오.

자주 묻는 질문

참고문헌

표의 숫자는 전부 제조사 프로토콜 페이지에서 효소별로 인용한 것이며, 효소 사이에서 일반화한 값은 없습니다. 어느 행이 어느 문서에서 왔는지는 결과 카드에도 표시됩니다.

  1. New England Biolabs. PCR Protocol for Taq DNA Polymerase with Standard Taq Buffer (NEB #M0273). Read 2026-08-18, re-read 2026-08-22.https://www.neb.com/en/protocols/taq-dna-polymerase-with-standard-taq-buffer-m027395 °C 30 s → [95 °C 15–30 s / 45–68 °C 15–60 s / 68 °C 1 min/kb] × 25–30 → 68 °C 5 min · 신장 온도가 72 °C 가 아니라 68 °C 입니다
  2. New England Biolabs. PCR Using OneTaq DNA Polymerase (NEB #M0480). Read 2026-08-18, re-read 2026-08-22.https://www.neb.com/en/protocols/onetaqdnapolymerasem048094 °C 30 s → [94 °C 15–30 s / 45–68 °C 15–60 s / 68 °C 1 min/kb] × 30 → 68 °C 5 min
  3. New England Biolabs. PCR Using Q5 High-Fidelity DNA Polymerase (NEB #M0491). Read 2026-08-18, re-read 2026-08-22.https://www.neb.com/en/protocols/pcr-using-q5-high-fidelity-dna-polymerase-m049198 °C 30 s → [98 °C 5–10 s / 50–72 °C 10–30 s / 72 °C 20–30 s/kb] × 25–35 → 72 °C 2 min
  4. New England Biolabs. PCR Protocol for Phusion High-Fidelity DNA Polymerase (NEB #M0530). Read 2026-08-18, re-read 2026-08-22.https://www.neb.com/en/protocols/pcr-protocol-m053098 °C 30 s → [98 °C 5–10 s / 45–72 °C 10–30 s / 72 °C 15–30 s/kb] × 25–35 → 72 °C 5–10 min
  5. New England Biolabs. PCR Protocol for LongAmp Taq DNA Polymerase (NEB #M0323). Read 2026-08-18, re-read 2026-08-22.https://www.neb.com/en/protocols/m0323-longamp-taq-dna-polymerase-protocol94 °C 30 s → [94 °C 15–30 s / 45–65 °C 15–60 s / 65 °C 50 s/kb] × 30 → 65 °C 10 min · 효소 5종 중 세 번째 신장 온도(65 °C)

어닐링 온도는 어느 프로토콜도 한 값으로 제시하지 않고 제조사의 Tm 계산기를 사용하라고 적기 때문에, 이 도구도 인쇄된 범위만 표시합니다.

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